TITULO: POTENCIAL INIBITÓRIO DAS TETRACICLINAS SOBRE A GP63 DE Leishmania (Leishmania) amazonensis
Aluna: HILDA CARLA AZEVEDO GÓES
Orientador: ALEJANDRO FERRAZ DO PRADO
Resumo:
As Leishmanioses são doenças de grande importância epidemiológica ao redor do mundo e principalmente no Brasil. Seu agente etiológico é o protozoário Leishmania spp., que possui acurada capacidade de silenciar mecanismos microbicidas de macrófagos, pela ação de fatores de virulência como a GP63. Esta glicoproteína é a principal metaloprotease de leishmania capaz de modular a resposta imune do hospedeiro vertebrado ao clivar um conjunto amplo de substratos citosólicos. Seu sítio catalítico (motif HEXXH) atua coordenado ao íon zinco. Sabe-se que as tetraciclinas possuem a propriedade de quelar metais e está associada a inibição de outras metaloproteases de matriz. No presente trabalho buscou-se avaliar se a doxiciclina (DOX) e a minociclina (MIN) são capazes de inibir a GP63 de promastigota Leishmania (L.) amazonensis. As formas promastigotas foram submetidas a tratamento com DOX e MIN, em doses subantimicrobianas (0,1 mM, 0,2 mM e 0,5mM), por um período de 72h, em ensaios in vitro. A inibição sobre GP63 foi avaliada pela degradação do substrato DQ gelatin® e pela técnica zimograma. Seguiu-se com a análise da viabilidade celular do macrófago de linhagem J774-G8 e da promastigota por MTT e Alamar Blue®. A morfologia ceular foi avaliada por microscopia óptica e a produção de espécies reativas de oxigênio foi investigada por CellRox Green®. Os dados foram analisados no programa GraphPad Prism 6.0, pelo método ANOVA (significância p < 0,05). Observou-se DOX e MIN inibiram a atividade proteolítica GP63 de L. (L.) amazonensis em todas as concentrações testadas. Não foi observado citotoxidade na célula hospedeira. Nas promastigotas DOX e MIN provocaram alterações morfológicas, levando ao encurtamento do corpo celular e flagelo e somente a MIN provocou duplicação de flagelos. A DOX apresentou significativo efeito antioxidante. O presente estudo mostra pela primeira vez a inibição da atividade proteolítica de GP63 em promastigotas de L. (L.) amazonensis pela ação de tetraciclinas (DOX e MIN).
Palavras-chave: Minociclina, Doxiciclina, Leishmania (L.) amazonensis, Metaloprotease GP63, Quelante de Metais.
Banca Examinadora:
Profa. Dra. SILVIA HELENA MARQUES DA SILVA
Profa. Dra. BARBARELLA DE MATOS MACCHI
Prof. Dr. BRUNO JOSÉ MARTINS DA SILVA
Prof. Dr. FRANCISCO TIAGO DE VASCONCELOS MELO (Suplente)
LOCAL: PAT 05- ICB UFPA
DATA: 18/11/2019
HORA: 14:00H