TITULO: DESENVOLVIMENTO DE UMA qPCR MULTIPLEX PARA DETECÇÃO DE SALMONELLA sp. E TRYPANOSSOMA CRUZI EM POLPA DE AÇAÍ

ALUNO: DANILO LEÔNCIO AGUIAR PEREIRA

Resumo:

Atualmente mais de 200 doenças transmitidas por alimentos são responsáveis por aproximadamente 600 milhões de infecções e intoxicações anualmente no mundo. Alguns patógenos como a Salmonella têm como principal via de infecção alimentos contaminados, enquanto outros podem em condições específicas serem transmitidos por essa via como Trypanosoma cruzi. O tempo de resposta até a confirmação da presença da Salmonella é um gargalo logístico para a indústria alimentícia, e surtos de doença de chagas transmitida pelo consumo de polpa de açaí contaminado é atualmente um problema de saúde pública podendo acarretar sérios prejuízos econômicos. O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma qPCR multiplex com a inclusão de um controle interno de amplificação para a detecção de Salmonella sp. e Trypanosoma cruzi em polpa de açaí. Um total de 210 amostras de açaí das quais 150 foram amostras de campo e 60 foram amostras de açaí pasteurizado utilizadas em um teste cego onde algumas seriam artificialmente contaminadas com os Salmonella e Trypanosoma cruzi para verificar a exatidão, precisão, sensibilidade, especificidade e limite de detecção da qPCR além de verificar a concordância entre o método de referência e a qPCR para a detecção de Salmonella. Das 60 amostras do teste cego analisadas nesse estudo a qPCR multiplex apresentou sensibilidade de 98,0%, especificidade de 100% e exatidão de 97% em relação a detecção de Salmonella sp. Para Trypanosoma cruzi a sensibilidade, especificidade e exatidão foram de 100%. A concordância entre o método de referência baseado em cultura e a qPCR multiplex foi de 88,33% e o coeficiente kappa = 0,78. Das 150 amostras de campo analisadas, não foi detectado T. cruzi, sendo seis amostras inconclusivas para a presença de Salmonella sp. O controle interno de amplificação foi inserido com sucesso na qPCR e teve como alvo uma sequência do DNA de Euterpe oleracea. Discussão: Os parâmetros usados na avaliação da qPCR multiplex desenvolvida neste estudo demonstraram alta sensibilidade, especificidade e exatidão, além de terem uma forte concordância com o método de referência para a detecção de Salmonella sp., além de apresentarem sensibilidade, especificidade e exatidão de 100% para a detecção de Trypanosoma cruzi em polpa de açaí. Adicionalmente, a presença do controle interno de amplificação garante a funcionalidade do teste. Conclusão: Neste estudo foi desenvolvida uma qPCR multiplex para detecção de Salmonella sp. e Trypanosoma cruzi em polpa de açaí. Esta qPCR multiplex pode ser usada como método alternativo para detecção de Salmonella sp., oferecendo um menor tempo de resposta. Adicionalmente o uso do controle interno de amplificação garante a funcionalidade do teste. Esta qPCR multiplex pode tornar mais rápida a pesquisa de Salmonella sp. e agregar valor à cadeia produtiva do açaí diminuindo o risco de surtos de doença de chagas transmitida por açaí contaminado.
Palavras chave: Salmonella sp. Trypanosoma cruzi, qPCR multiplex.

Banca Examinadora:

Profa. Dra. EDILENE OLIVEIRA DA SILVA

Prof. Dr. FELIPE BONFIM FREITAS

Profa. Dra. CINTYA DE OLIVEIRA SOUZA

Profa. Dra. JACQUELINE CORTINHAS MONTEIRO

Profa. Dra. ROSIMAR NERIS MARTINS FEITOSA (Suplente)

LOCAL: Auditório LABVIR/ICB/UFPA

DATA: 28/06/2018

HORA: 8:30H